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| 目的 研究微小RNA-224-5p(miR-224-5p)调控Notch信号通路对髓核细胞衰老及凋亡的影响。方法 收集我院椎间盘退变患者的椎间盘组织并分离出髓核细胞，将细胞分为Model组、miR-224-5p NC组、miR-224-5p mimics组、miR-224-5p mimics+pcDNA-NC组、miR-224-5p mimics+pcDNA-Notch 2组，另收集并分离人椎间盘正常髓核细胞为Control组。分别检测各处理组髓核细胞miR-224-5p、Notch 2和DLL1 mRNA表达水平(RT-qPCR法),各组髓核细胞活性(CCK-8法),各组髓核细胞凋亡情况(流式细胞术法),髓核细胞衰老情况(β-半乳糖苷酶染色法),髓核细胞中Notch 2、DLL1、Bcl 2和Caspase 3蛋白表达量(Western Blot法);双荧光素酶报告实验验证miR-224-5p与Notch 2之间的靶向关系。结果 免疫荧光染色显示椎间盘退变髓核细胞中Ⅱ型胶原蛋白和多聚糖蛋白含量减少，说明临床椎间盘退变患者的髓核中发生变性，本研究髓核细胞病理模型提取成功。与Control组比较，Model组髓核细胞miR-224-5p表达水平、细胞活力和Bcl 2蛋白表达量明显降低，Notch 2 mRNA和DLL1 mRNA表达水平、细胞凋亡率、β-半乳糖苷酶染色阳性率、Notch 2、DLL1和Caspase 3蛋白表达量显著升高(P<0.05);与miR-224-5p NC组比较，miR-224-5p mimics组髓核细胞中miR-224-5p表达水平、细胞活力和Bcl 2蛋白表达量明显升高，Notch2 mRNA和DLL1 mRNA表达水平、细胞凋亡率、β-半乳糖苷酶染色阳性率、Notch 2、DLL1和Caspase 3蛋白表达量显著降低(P<0.05);与miR-224-5p mimics+pcDNA-NC组比较，miR-224-5p mimics+pcDNA-Notch 2组髓核细胞中细胞活力和Bcl 2蛋白表达量明显下降，Notch2 mRNA和DLL1 mRNA表达水平、细胞凋亡率、β-半乳糖苷酶染色阳性率、Notch 2、DLL1和Caspase 3蛋白表达量明显升高(P<0.05)。实验验证了miR-224-5p与Notch 2之间存在靶向关系(P<0.05)。结论 椎间盘退变患者髓核细胞中miR-224-5p表达水平明显降低、细胞衰老和凋亡现象明显，过表达miR-224-5p可通过抑制Notch信号通路减轻髓核细胞的衰老和凋亡，增强髓核细胞活力。 |
| 关键词: 微小RNA-224-5p 髓核细胞 衰老和凋亡 Notch通路 |
| DOI：10.16252/j.cnki.issn1004-0501-2025.10.008 |
| 分类号:R681.53 |
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