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| 目的探讨CoCl2刺激的黑素瘤A375细胞上皮间质转化和糖酵解的作用机制及SB-431542对此的干预作用。方法选用本团队前期已证实的安全有效浓度的CoCl2（50～150μmol/L）刺激黑素瘤A375细胞,建立体外低氧模型,Western Blot检测HIF-1α、Nodal、上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、Vimentin、MMP2及糖酵解各组分蛋白LDH-A、LDH-B的表达,以明确CoCl2对A375细胞上皮间质转化和糖酵解的影响作用。随后研究SB-431542对Nodal-ALK4-ALK7介导A375细胞上皮间质转化和糖酵解反应的抑制作用:本部分拟筛选安全有效浓度的Nodal受体抑制剂（SB-431542）分别作用于CoCl2介导的低氧模型,通过MTT实验确定SB-431542的安全浓度用于后续实验。Western blot检测SB-431542对CoCl2诱导细胞上皮间质转化和LDH活化相关蛋白的影响;琼脂糖凝胶电泳检测LDH同工酶谱的变化情况;此外,使用Western blot检测Nodal及其受体（ALK4、ALK7）的表达。结果 CoCl2可显著上调细胞上皮间质转化相关蛋白Vimentin、MMP2和促瘤相关蛋白Nodal及其受体（ALK4、ALK7）的表达,且表达与作用浓度成正相关; CoCl2能促进糖酵解活化相关蛋白表达,其中LDH-A表达上调,LDH-B的表达受到抑制（P<0.05）。MTT结果显示10μmol/L SB-431542处理48 h对细胞的增殖影响最小（P<0.05）; SB-431542可抑制Vimentin、MMP2和Nodal及其受体ALK4、ALK7表达（P<0.05）;促进糖酵解途径的相关蛋白LDH-A的表达下调（P<0.05）,抑制糖酵解途径相关蛋白LDH-B的表达上调（P<0.05）。结论CoCl2可诱导黑素瘤细胞上皮间质转化及糖酵解。SB-431542可通过抑制CoCl2诱导的Nodal-ALK4-ALK7信号通路抑制与上皮间质转化及糖酵解相关分子的表达。 |
| 关键词: 黑素瘤细胞 二氯化钴 SB-431542 上皮间质转化 糖酵解 |
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