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| 目的 构建携带缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的慢病毒载体p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1,并转染骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived stem cells,BMSCs),检测该慢病毒载体在BMSCs的表达。方法 从Puc-57-HIF-1α载体中扩增出HIF-1α基因片段,将HIF-1α基因片段与载体连接,获得慢病毒载体p LVXHIF-1α-IRES-Zs Green1,将其与慢病毒包装系统共同转染到293T细胞内进行病毒包装,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达来测定病毒滴度。将p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1转染到BMSCs细胞内,通过Real-Time PCR和CCK-8法分别检测HIF-1αmRNA表达及BMSCs增殖能力。结果 PCR及测序结果显示慢病毒载体p LVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1构建正确,病毒滴度为3×108TU/m L。p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1转染BMSCs后,BMSCs中HIF-1αmRNA表达水平及BMSCs细胞增殖能力明显高于非转染组(P<0.05)。结论 成功构建HIF-1α基因慢病毒载体p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1,该慢病毒载体可以介导HIF-1α基因在BMSCs中稳定表达,并提高BMSCs增殖能力 |
| 关键词: 骨髓间质干细胞 缺氧诱导因子-1α 慢病毒载体 |
| DOI： |
| 分类号:R742 |
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